该细胞来源于人静脉内皮,可在半固体培养基中形成克隆,
细胞特性
1)来源:人静脉内皮
2)形态:内皮细胞
3)含量:>1x106
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
人脐静脉细胞HUVEC运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:
(1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;
(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
(3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。
细胞用途:仅供科研使用。
细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,酒精消毒瓶壁并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3)弃去T25瓶中的培养基,添加6ml完全培养基。
4)如果细胞长满80%-90%请及时进行细胞传代。
5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备ECM培养基;优质胎牛血清,5%;添加对应因子;双抗,1%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜。第二天检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含6ml培养基瓶中。
注:*次传代推荐传代比例为1:2,以后传代比例可根据客户需要自己决定。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
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